|
|
本试剂盒用于体外转录产生带有FITC、Cy3、Cy5、Biotin、DIG等修饰RNA探针，获得的RNA探针适合原位杂交，Northern blot杂交，RNA蛋白相互作用。可以适当渗入FITC/Cy3/Cy5/DIG/Bio等，片段在500-1200之间，标记效率已优化。修饰后的RNA探针可通过光谱仪检测。
组成
|
Cat. No |
Product Name |
Size |
Number |
Store |
|
R5210-1 |
T7 RNA 聚合酶Buffer（10X） |
50ul |
1 |
-20℃ |
|
R5210-2 |
T7 RNA聚合酶 |
50ul |
1 |
-20℃ |
|
R5210-3 |
NTP Mix（Cy5） |
200ul |
1 |
-20℃ |
|
R5210-5 |
DNA质控模板 |
5ul |
1 |
-20℃ |
|
R5210-6 |
RNase Inhibitor |
25ul |
1 |
-20℃ |
|
R5210-7 |
无核酸酶水 |
1ml |
1 |
-20℃ |
DNA模板获得
DNA模板可以是质粒DNA、寡核苷酸退火双链、PCR产物或cDNA等等。
DNA模板必须是线性的，包含转录起始位点的T7 RNA聚合酶启动子序列。
实验操作
（1）模板准备：
1）添加T7 启动子序列，引物扩增目的基因片段（我公司可以提供）。
2）寡核苷酸退火提供PCR片段（我公司可以提供）。
3）cDNA合成的制备的模板。
4）务必将需要带有T7启动子序列引入的基因组序列。
（2）戴好手套，口罩，冰上操作，按以下顺序配制反应混合液；
|
10×Buffer |
2ul |
|
NTP Mix（Cy5、Cy3等） |
8ul |
|
DNA模板 |
0.2-1ug |
|
RNase Inhibitor |
1ul |
|
T7 RNA聚合酶 |
2ul |
|
无核酸酶水 |
Xul,Add to 20ul |
|
Total |
20ul |
（3）用枪头轻轻混匀，在37°C条件下孵育1-2小时；对小短片段，需要孵育4小时；
（4）胶回收纯化合成的RNA、或乙醇沉淀纯化的RNA，可凝胶电泳检测转录产物；
（5）荧光效率标记和浓度可以通过光谱仪或核酸检测仪。
上一篇：外显子氨解仪说明书
下一篇：外显子生物-设备耗材
