细菌原位杂交：培养细菌和组织标本
培养后的细菌原位杂交：
（1） 细菌FISH探针的浓度为25-60μg/ml，即大约5-25μM浓度，杂交液稀释20-50倍。
（2） 将菌株震荡混合10秒，用钻石笔在玻璃上画圈，利用移液枪滴加50μL的细菌，并将载玻片置于37℃或室温干燥后1-24小时。
（3） 利用梯度乙醇浓度(50%，85%和95%)脱水，每次3分钟。在100%乙醇中脱水后，将载玻片风干，约1-60分钟。
（4） 杂交液稀释细菌探针（1:50）。取50μL探针溶液加在玻片上，加玻片，多出溶液用纸巾擦拭。放入孵育盒，然后盖好密封盖，避光48°C中杂交5小时或37℃过夜。
（5） 配置洗涤缓冲液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl，0.1% SDS)，在46°C或37℃的水浴中浸泡30分钟。
（6） 再利用纯水浸泡10分钟，去除多余的盐分。每片加50μL 抗荧光淬灭剂DAPI，室温避光静置20分钟。荧光显微镜下，观察结果，拍照。
新鲜组织的细菌原位杂交：
（1） 取材新鲜活体组织，使用卡氏固定液，固定3-12小时。石蜡包埋，切片5-8μM。
（2） 二甲苯中浸泡2次，10分钟每次，在梯度乙醇50%，80%和95%中，按顺序脱水，每次3分钟，晾干标本，约1-2小时。
（3） 将杂交液与探针按照25:1稀释细菌探针。取50μL探针溶液加在玻片上，加玻片，纸巾擦拭干净。放入保湿孵育盒，封盖，避光48°C中杂交5小时，或37℃过夜。
备注：如果是陈旧标本需要使用细菌原位杂交试剂进行处理，如需要，请联系我们。
（4） 洗涤缓冲液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl，0.1% SDS)，在46°C或37℃的水浴中浸泡30分钟。
（5） 再利用纯水浸泡10分钟，去除多余的盐分。每片加50μL 抗荧光淬灭剂DAPI，室温避光静置20分钟。观察结果。
（6） 在40倍或60倍或100倍荧光显微镜下观察，拍照。
如果遇到更多问题，请联系我们。我们提供探针、试剂盒、耗材、设备等等。
联系电话：020-89895006 180 1199 7127(24小时值班电话) E mail：focobio@126.com
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