产品说明
细胞核中的DNA为负超螺旋结构，而且很致密，通常DNA双链以组蛋白为核心，盘旋而形成核小体。当用去污剂破坏细胞膜和核膜，用高浓度盐提取组蛋白，DNA残留而形成类核。如果类核中的DNA有断裂，断裂点将引起DNA致密的超螺旋结构松散，在类核外形成一个DNA晕圈。将类核置于电场中电泳，DNA断片可从类核部位向阳极迁移，经荧光染色后，在阳极方向可见形似彗星的特征性图像，故称"彗星试验"。彗星尾部即为迁移出类核的DNA片段。此时彗星尾部有可能还与头部以单链或双链的形式相连。DNA损伤越严重，导致DNA超螺旋结构越松散，产生的断裂点越多，DNA片段越小，从而在彗星尾部出现的DNA断片越多，则慧尾的长度、面积和荧光强度越大。通过测量彗星尾部的长度、面积或荧光强度等指标，可以对DNA的损伤程度进行定量分析。本产品试剂及操作经过优化改良，操作简便，使用普通载玻片即可进行，不需要使用磨砂玻片，操作过程中不易掉片；一次性制备大量样本，做好的片子可长期保存，解决了传统操作中易掉片，不易保存等问题。
试剂盒组成（略）
注意
1. 细胞裂解液、碱性电泳缓冲液，应根据需求，现配现用。
2. PI染液应避光低温保存，染色时也应在暗处进行操作
需要自备的试剂、耗材与仪器
试剂：碱性电泳缓冲液（1mM EDTA，300mM NaOH）（现配现用）、PBS、无水乙醇； 耗材：1.5 ml 管、载玻片、22×22mm及24×24mm盖玻片 仪器：恒温干燥箱、微量移液器、水浴锅、水平电泳仪 实验前准备：
0.5%正常熔点琼脂糖溶液：向装有正常熔点琼脂糖粉末的瓶中加6 ml PBS,微波炉加热溶解，45℃水浴
锅放置； 0.7%低熔点琼脂糖溶液：向装有低熔点琼脂糖粉末的瓶中加4.3ml PBS,沸水浴中加热直至完全溶解（或微波高火30s,取出摇匀，再次高火10-30s，直至溶解），37℃水浴锅放置。 1×中和液：根据实验需求，将10×中和液与蒸馏水按1：9比例稀释，放于4℃冰箱预冷后使用。
实验步骤
1、新鲜收集的细胞用冰冷的PBS洗一次，离心收集，PBS重悬使其密度为 1x106个/mL；
2、铺胶：下述各浓度琼脂糖凝胶均用 PBS 配制，
第 1 层凝胶的制备：取干净的载玻片，滴加100ul 45℃预热的0.5%正常熔点琼脂糖，加22×22mm盖玻片，4℃放置3 min,待胶凝固后，推去盖玻片，于60℃烘箱烤30min,直至胶完全干透，此时片子可室温干燥条件下密封保存一周。 第 2 层凝胶的制备：取已铺好第一层胶的玻片，将 10μL细胞（约 10 4 个）和 75μL 37℃预热的 0.7%低溶点琼脂糖混合均匀。迅速将含细胞的琼脂糖滴到第1层琼脂糖上，立即盖上另一干净盖玻片（22×22mm），置 4℃ 2 min 使第2 层 LMA 凝固。 第 3 层凝胶的制备：第 2 层凝固后，在室温下小心移去盖玻片，滴加预热 37℃的75μL的 0.7%低溶点琼脂糖，如上盖上盖玻片(22×22mm),4℃下凝固2 min。
3、细胞裂解 移去盖玻片，将玻片置于平皿中，倒入预冷的细胞裂解液（使用前每 9mL加入 1mL 的 DMSO），4℃裂解 1~2h，取出载玻片用 PBS 漂洗。
4、DNA碱解旋 将载玻片置于水平电泳槽。倒入新配制的碱性电泳缓冲液，约覆过载玻片胶面 0.25cm 左右，室温放置 20~60min,以便使DNA在碱性条件下解螺旋和产生碱易变性区段，使DNA断链在电场中易于迁移。
5、单细胞电泳 在电压 25V下，电泳 20-30 min。
6、中和 电泳后将载玻片置于平皿内。加入中和缓冲液，将载玻片没入，4℃中和三次，每次 10min，弃去 Tris-HCl 缓冲液。
7、脱水干燥 将片子浸入无水乙醇中15min，重复两次，然后取出晾干，直至胶完全干透变薄，4℃下避光保存。
8、取出片子，滴加20 ul PI染液，盖上盖玻片，室温染色10 min，显微镜下观察拍照。
9、随机选择100个细胞，通过软件（如CASP）测量彗星头部直径和尾长，根据尾长和头部直径比值，估计DNA的损伤程度。

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