碱性磷酸酶检测试剂盒（Alkaline Phosphatase Assay Kit）

货号：AP-T02  规格：100T    价格：310元

保存条件：4℃运输，-20℃保存，1年，避光。

研究背景：在科研实验或临床标本检测中，常需检测碱性磷酸酶的含量，如细胞上清、组织裂解、肺泡盥洗液、血清、血浆、分泌物、尿液，唾液等。碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，又称AP，标准的酶学称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)。该酶在碱性条件下，催化水解磷酸酯键。一般真核或哺乳动物的肝脏、肾脏、骨组织、胎盘中的碱性磷酸酶含量较多，该酶高温容易失活，该酶的具体分类多。一般来说，所有干细胞的碱性磷酸酶的活性高，可以认为干细胞诱导的成功的标志。其次在肿瘤研究中，结肠癌、肝癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会升高，人群中，儿童、部分肿瘤患者、孕妇、血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。

检测原理：pNPP是一种常用的磷酸酶显色底物，在碱性条件下，生成底物呈黄色，可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深，碱性磷酸酶检活性与荧光数值呈线性关系，正相关。通过比色或荧光分析可计算碱性磷酸酶活性多少。

试剂盒组成：

A01：pNPP显色液；2支， A02：DEA缓冲液 15ml； A03：2N NaOH终止液：15ml

A04：p-nitropheno标准品（10mM）：0.1ml。

使用说明：
1.准备显色底物溶液：底物溶于2.5 ml检测缓冲液（50T），混匀，4℃放置。

2.标准品工作液：10μl pNPP溶液，加入检测缓冲液稀释至190ul，浓度为0.5mM。3.样品准备：细胞或组织裂解液的准备：匀浆或者破碎组织，细胞直接裂解，用实验室常用细胞裂解液或者购买我公司蛋白裂解液，样品不要反复冻融。血浆、分泌物、血清和尿液的准备：直接加样。样品稀释：如样品中含较高的碱性磷酸酶，用PBS或检测缓冲液等进行稀释。

4.设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、32ul，样品通常可以直接加25-100ul。利用96孔板或0.2ml离心管，如下表配制：混合：配制上述体积后，利用摇床或手动轻轻混匀。

5.孵育：在37℃条件下孵育10-30分钟。
6.终止反应：加入100μl反应终止液终止反应，此时呈现不同黄色。
7.在400-420nm范围内检测吸光度。也可以用荧光检测，最长放置4小时有效。
8.计算结果：酶的活性背景：AP活性单位定义：二乙醇胺(DEA)是应用酶底物检测碱性磷酸酶的首选缓冲液。DEA缓冲液具有良好的反应动力学和更大的灵敏度。在该缓冲液25℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的碱性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位，称一个DEA酶活力单位，计算出样品中的碱性磷酸酶活性。

实验须知：酶反应时间与孵育时间相关，一般孵育30分钟，如样品中酶活性较高，预稀释样品。EDTA、钙离子，氟离子、柠檬酸盐，pH等对碱性磷酸酶抑制。p-nitrophenol溶液对人体有害，请小心，戴手套防护。

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