T细胞受体（TCR）基因重排的PCR和FISH检测与意义
1.TCR基本概念：
T 细胞受体（TCR）是由两个多肽组成的膜结合异二聚体。异源二聚体由两条多肽链（ab 或 gd多肽链），它们通过二硫键连接在一起并与一个细胞质膜结合的复合蛋白，统称为 CD3。
在外周血中，大多数 T 细胞表达 ab 受体，约15%的 T 细胞表达 gd 受体。TCR 胞外结构域由一个恒定（C）结构域和一个可变（V）结构域组成。
TCR V 结构域内编码的互补性决定区（CDR）。与多肽抗原和主要组织相容性(MHC) 分子接触，从而赋予 TCR 特异性。此外，T细胞是受 MHC 限制的，因为 CD4 阳性或辅助 T 细胞识别与 MHC-II类分子结合的肽，而 CD8 阳性或抑制性T 细胞识别与 MHC I 类分子结合的肽。因此，检测TCR，其实就是了解T细胞的更详细的功能。
2.基因重排检测方法：
基因重排是T 细胞发生过程中的一个重要事件，它能使 T 细胞特异性地识别抗原，这一过程中的任何变化都可能导致疾病。检测手段包括Southern印迹杂交、聚合酶链式反应 (PCR) 、FISH和流式细胞术等技术。
3基因重排与临床：
检测 T 细胞增殖的特征变化。在临床疾病中T细胞增殖异常，包括免疫缺陷、自身免疫和过敏性疾病中 T 细胞增殖的特征和变态反应。此外，淋巴细胞疾病及其与反应性淋巴细胞增生，监测MRD病和 CD8+ 淋巴细胞增多症患者。还可以监测治疗或骨髓移植后的 MRD。
4.检测缺陷：
PCR 引物较多，变异性大，会发生一定的假阴性发生率。尽管很多研究使用了共识引物，但是PCR 技术的假阴性发生率也很高，因此研究者仍然需要设计更好的引物，不断优化。
5.TCR检测带来的问题
TCR能否用原位杂交检测呢？实际上TCR是可以用原位杂交检测的，但是要根据具体序列来判断，如果序列差异比较大，可以用原位杂交来检测，如果基因差异比较小，比如相差几个碱基，那么只能用滚环复制的原位杂交（RCA-FISH）来检测。一般来说用PCR来检测是可以，当然测序也可以检测。
6.常见的检测引物位置：
目前，大部分引物都被公布在各种文献，可以查阅到。
参考文献：
1. Hodges E, Krishna MT, Pickard C, Smith JL. Diagnostic role of tests for T cell receptor (TCR) genes. J Clin Pathol. 2003 Jan;56(1):1-11. doi: 10.1136/jcp.56.1.1. PMID: 12499424; PMCID: PMC1769865.
2. van Dongen JJ, Langerak AW, Brüggemann M, Evans PA, Hummel M, Lavender FL, Delabesse E, Davi F, Schuuring E, García-Sanz R, van Krieken JH, Droese J, González D, Bastard C, White HE, Spaargaren M, González M, Parreira A, Smith JL, Morgan GJ, Kneba M, Macintyre EA. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003 Dec;17(12):2257-317. doi: 10.1038/sj.leu.2403202. PMID: 14671650.
3. Boria I, Cotella D, Dianzani I, Santoro C, Sblattero D. Primer sets for cloning the human repertoire of T cell Receptor Variable regions. BMC Immunol. 2008 Aug 29;9:50. doi: 10.1186/1471-2172-9-50. PMID: 18759974; PMCID: PMC2551579.
4. Cikota BM, Tukić LJ, Tarabar OT, Stamatović DT, Elez MN, Magić ZM. PCR-based clonality assessment in patients with lymphocytic leukaemias: a single-institution experience. J Genet. 2009 Dec;88(3):309-14. doi: 10.1007/s12041-009-0044-8. PMID: 20086296.
上一篇：猕猴原位杂交探针系列
下一篇：没有了!
