E-Vison鼠/兔通用HRP二抗免疫组化显色试剂盒

货号：EM-P002   100T

* 免疫组化显色试剂盒简介：

本试剂盒是特异性强敏感度高的敏二步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗体、小鼠抗体结合。试剂1是标记有辣根过氧化物酶的和抗兔抗小鼠抗体多聚体复合物分子，即复合体二抗。与兔抗或鼠抗一抗结合。结合后辣根过氧化物酶被标记在组织上，再与DAB反应，得到棕色显色。本试剂不受内源型生物素干扰。染色背景非常清晰。实验盒步骤少，操作简单，背景低特点。

* 产品应用前准备：

1)常规脱蜡：将石蜡切片浸于二甲苯：5分钟，三次。再置于100％无水乙醇中3分钟两次；再分别置入90%与75%酒精，各3分钟。用PBS浸泡2次，每次3分钟。

2)抗原修复：用EDTA修复液或者其他合适修复液，修复12分钟-20分钟，或一抗说明书进行修复。

3)DAB工作液的配制：实验前10分钟，按20:1的比例稀释显色缓冲液和DAB显色剂，混匀避光备用。

* 实验步骤：

1）取出切片，甩掉并擦干切片上的液体，放于湿盒中，滴加3%过氧化氢阻断内源性过氧物化酶。避光孵育10-15分钟。用PBS浸泡3次，每次3分钟。取出切片，甩干组织上液体，备用。

2）滴加50µl一抗（兔抗或小鼠抗）工作液于组织上，室温孵育30-60分钟或4℃过夜（效果好）。 用PBS冲洗切片，3次，每次3分钟，取出切片，甩干组织上液体（勿干燥），备用。

3）滴加50µL鼠兔通用HRP二抗于组织上，室温孵育30-50分钟。将切片放入PBS缓冲液中，洗3次，每次3分钟，取出切片，甩干组织液体，勿干燥，平放于湿盒中备用。

4）滴加前面配制的显色剂DAB工作液50-100µl，室温孵育5-15分钟，或光镜下控制显色过程。棕色显色完全后，蒸馏水冲洗终止显色，部分微量阳性细胞的需要油镜镜下观察。

5）苏木精复染：70%酒精、95%或100%酒精，浸泡3分钟。取出切片，置入二甲苯5分钟，2次。

6）用中性封片胶封。

*  产品保存与注意事项：

1）保存于条件2-8℃，切勿反复冻融。

2）抗原修复后的过程，免疫组化染色过程中尽可能

避免组织片干燥，否则易出现背景假阳性。

3）获得良好染色效果主要在于抗原修复、厂家的一抗，建议设置阴阳性对照，比如Ki67等。

4）在使用本公司提供的操作方法遇到困难，请联系我们。

仅供研究，不用于临床诊断,上图是P63抗体效果图，诊断试剂另行联系我们。

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