小分子药物，核苷酸，抗体等，生物素或荧光素标记服务
外显子生物经可以为客户提供药物-生物素，荧光分子，分子偶联等标记服务，将客户目的药物，核苷酸序列、抗体、化药进行标记，以便于对核酸探针，核酸药物、化学药物进行追踪和代谢性分析。
同时，提供质谱质谱分析。案例如下：
【实验方法】某某分子需要标记生物素
【方法原理】
1）底物A-OH + Br-CH₂-C≡CH 在一定条件下生成底物A-O-CH₂-C≡CH
2）底物A-O-CH₂-C≡CH + Biotin-PEG4-alkyne ，在点击化学条件下，生成底物A-O- CH₂-1,2,3-triazole-PEG4-Biotin
【试剂与材料】无水K₂CO₃，炔丙基溴，无水DMF，乙酸乙酯，饱和NaHCO₃溶液，饱和NaCl溶液，无水Na₂SO₄ ，Biotin-PEG4-azide，THPTA（配体）， t-BuOH ，CuSO₄·5H₂O，抗坏血酸钠，DMSO，饱和NaHCO₃溶液，饱和食盐水，EDTA。
【主要仪器】 摇床、振荡器，管式离心机，冰箱（海尔）、微量移液枪（10l、100l、1ml）（eppendorf）、15ml离心管、50ml离心管。
【J24分子结构】
【实验步骤】
第一步：炔丙基引入
步骤1：反应体系搭建（10分钟）
1) 将20.0 mg底物称入一个15 mL离心管中（或带搅拌子的5 mL圆底烧瓶）。
2) 加入1.0 mL无水DMF，搅拌至完全溶解（如果溶解慢，可用水浴稍加热至40℃，直到溶液澄清）。
3) 加入16.6 mg无水K2CO3（粉末），搅拌形成白色悬浮液。
步骤2：滴加炔丙基溴（2分钟）
4) 用移液枪吸取6.5 μL炔丙基溴/甲苯溶液。
5) 在室温搅拌下，缓慢将炔丙基溴溶液滴加到反应瓶中（约15秒滴完）。
步骤3：加热反应（2-4小时）
6) 将反应瓶转移到50℃水浴中，搅拌反应。
7) TLC监控：立即取第1个TLC点（0 min），之后每30分钟取样一次。
8) 取样方法：用毛细管蘸取约1 μL反应液，点在TLC硅胶板上。
9) 展开剂：石油醚:乙酸乙酯 = 2:1（可预先筛选）。
10) 显色：UV灯（254 nm）观察吸收，或用香草醛/硫酸加热显色。
11) 反应终点判断：当OH-A原料点基本消失，而OH-B点仍较明显时，停止加热（通常2-4小时）。
12) 如果2小时后OH-A仍有较多剩余，可补加1.0 μL炔丙基溴（约0.25当量），继续反应至完全。
步骤4：后处理（30分钟）
13) 将反应液冷却至室温。
14) 加入5 mL乙酸乙酯稀释。
15) 用5 mL饱和NaHCO₃溶液洗涤一次（洗去K2CO3和未反应的炔丙基溴）。
16) 用5 mL饱和NaCl溶液洗涤一次（进一步水洗，除去DMF）。
17) 收集有机相（上层），加入约0.5 g无水Na2SO4，静置干燥15分钟。
18) 过滤除去干燥剂，用旋转蒸发仪减压浓缩至干（水浴<40℃，避免产物分解），称重。
第二步：Biotin-alkyne 点击反应（CuAAC）
准备工作：溶液配制（提前准备，5分钟）
1) CuSO4储备液（0.1 M）：称取4.5 mg CuSO4·5H2O，溶于180 μL去离子水，涡旋溶解（可暂存于4°C）。
2) 抗坏血酸钠储备液（0.1M，现配现用）：称取11.9mg抗坏血酸钠，溶于180μL去离子水，立即使用（水溶液不稳定，需新鲜配制）。
3) THPTA储备液（0.2 M）：称取15.7 mg THPTA，溶于180 μL去离子水，涡旋溶解（可暂存）。
4) EDTA二钠水溶液（PH 8.0）：先配制饱和的EDTA二钠水溶液然后用饱和的碳酸氢钠溶液调PH值为8即可。
步骤1：反应体系搭建（10分钟）
5) 将16.0 mg单炔丙基化J24中间体和17.6 mg Biotin-PEG4-azide一起称入一个15 mL离心管。
6) 加入1.2 mL无水DMSO，搅拌至完全溶解（必要时可稍加热至40°C助溶）。
7) 依次加入：
t-BuOH 0.4 mL
去离子水 0.4 mL
（混合溶剂体积比 DMSO:t-BuOH:H₂O = 3:1:1，若产物溶解性差可调整为DMSO:H₂O = 4:1，不加t-BuOH）
步骤2：加入催化剂体系（顺序重要！）
8) 用移液枪加入：
THPTA储备液150 ul（1.2当量）
CuSO4储备液 150 ul（0.6当量）
（此时溶液变为浅蓝色）
9) 最后加入抗坏血酸钠储备液 150 ul（3.0当量），溶液立即变为浅黄色或无色（说明Cu(II)被还原为活性Cu(I)）。
10) 通入氮气或氩气置换1分钟，排除氧气（Cu(I)对氧敏感）。
步骤3：室温搅拌反应（1-3小时）
11) 在室温（20-25°C）下搅拌反应。
12) TLC监控：取反应液（约2 μL）点板，展开剂为DCM:MeOH = 8:1（或EA:MeOH = 5:1）。
预期Rf：原料（炔基中间体）约0.6-0.7；产物（生物素标记物）约0.2-0.4（因PEG链和生物素极性大）。
显色：UV（254 nm）观察；也可用香草醛/硫酸加热显色（生物素和PEG都会显色）。
13) 反应终点：当TLC显示原料点基本消失（或不再变化），停止反应（通常1-3小时，点击反应极快）。
步骤4：后处理（萃取除铜，20分钟）
14) 加入10 mL乙酸乙酯稀释有机相，再加入10ml配制好的 EDTA二钠水溶液（PH 8.0），剧烈震摇2分钟，静置分层。
15) 收集有机相（上层），再用10 mL饱和NaCl溶液洗涤有机相两次，除去残留DMSO和水溶性杂质。
16) 收集有机相用约0.5 g无水Na2SO4干燥15分钟，过滤，减压浓缩至干（水浴<40°C），称重。
【目标分子结构】
标记后：
【质谱图】
1. 理论峰计算（基于 M = 1014.324）
在负离子模式下，含生物素和 PEG 的大分子容易带上两个负电荷。
理论双电荷峰：[M-2H]²⁻ 的 m/z = (1014.324 - 2) / 2 = 506.16
2，代表图
