催化发夹组装（CHA）核酸检测试剂盒
（适用于血清ctDNA定量检测与活细胞miRNA原位成像）
货号：00.260706 规格：25T 储存：-20℃，避光 价格：1750元
一、产品简介与核心逻辑
本试剂盒基于改良的催化发夹组装（CHA）无酶信号放大技术，提供一套统一的荧光探针核心体系。用户仅需根据实验目的选择不同的应用路径：
路径A（体外定量）：将核心体系加入血清样本中，利用荧光信号强度对ctDNA进行绝对或相对定量；
路径B（原位成像）：将核心体系与转染试剂复合后导入活细胞，利用共聚焦显微镜对miRNA进行实时原位成像。
核心理念：一套体系，两种维度（体外定量+细胞内可视化），满足从液体活检到细胞生物学研究的全流程需求。
二、反应原理
本试剂盒所有应用均基于同一CHA循环反应：
目标核酸（ctDNA或miRNA）作为催化剂，依次打开发夹探针H1和H2，形成稳定的H1-H2双链体，同时释放目标核酸进入下一轮循环（信号放大）。H2上修饰的荧光基团与猝灭基团因发夹结构打开而分离，产生增强的荧光信号。信号强度与目标核酸初始量呈正相关。
三、检测流程：
前处理步骤:
探针退火活化（首次使用或长期未用）：将H1和H2分别置于95℃加热5分钟，缓慢自然冷却至室温（约30分钟），使其形成稳定的发夹茎环结构。
【路径A】血清样本中ctDNA的体外荧光定量检测
适用仪器：实时荧光定量PCR仪、荧光分光光度计或酶标仪（带荧光模块）。
1. 血清样本制备
采集外周血，4℃下1,600×g离心10 min取上清（血浆）；
再次16,000×g离心10 min去除残渣，取血清备用（-80℃可长期保存）。
2. 反应体系配制（20 μL体系）
退火后的H1和H2探针各1μL，1×反应缓冲液10 μL, 待测血清样本5 μL，无核酸酶水补足至20 μL。
3. 反应与检测
25~37℃恒温避光反应30~60分钟；
设定荧光通道（激发/发射依探针标记类型而定，如FAM为488/520 nm），读取终点荧光值或记录实时动力学曲线。
4. 结果判读
建立阳性对照梯度标准曲线，计算待测血清ctDNA绝对浓度；
阴性对照荧光值为背景基线。
【路径B】活细胞中miRNA的原位荧光成像
适用仪器：共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）或高分辨率荧光显微镜。
1. 细胞铺板
将待测细胞接种于共聚焦专用玻底培养皿中，于37℃、5% CO₂培养至密度达60%~80%。
2. 转染复合物制备
将退火后的H1与H2按体积比1:1 混合，取混合探针 2 μL；
加入脂质体lipo3000（转染试剂）2 μL，室温静置孵育15~20 min，形成CHA探针-转染复合物。
3. 细胞转染与成像
弃去细胞原培养基，PBS清洗2次；
加入上述复合物与无血清培养基的混合液，于培养箱中转染2~4 小时；
PBS清洗3次后，置于共聚焦显微镜下成像；
采集目标荧光通道（CHA信号）图像。
4. 结果判读
细胞质内出现特异性荧光点或弥散增强信号即为miRNA阳性表达；
荧光强度越高，目标miRNA表达水平越高。
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