原位滚环扩增检测技术
即原位核酸检测原理技术之一,滚环复制是一种特殊的DNA单链复制技术方法,常见于病毒、质粒,miRNA、mRNA、lncRNA或相差几个碱基的mRNA原位检测。它的核心原理可以概括为“边滚动,边合成核酸”。
具体过程如下:
1,设计环状探针与目的基因片段结合,中间突变位置设计不同探针;
2. 磷酸链接酶在环状寡核苷酸探针的暴露3’和5’端链接起来;
3.在引物条件下,开始对环状探针扩增,开始合成新的DNA链,随着新链合成,引物的5’端被不断“顶”出来,像从毛线球中拉出一根不断重复的线。
4.扩增德单链,数量不断增多,再用带荧光德探针去检测扩增的环状单链片段。
开展该实验:
(1)需要设计探针:1)环形探针Probe1 2)扩增引物Primer 3)检测探针Probe2
(2)需要的试剂:磷酸连接酶,扩增体Buffer,原位检测Buffer,洗涤液等。
如果需要上述探针和试剂,可以联系我们,感谢您的支持!
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