外周血的淋巴细胞是一种已成熟的不具有进行有丝分裂能力的细胞，故不能直接用其制备染色体标本。但淋巴细e胞在植物凝集素（PHA）的刺激下，能转变为具有细胞分裂能力的母细胞。因此，外周血必须经过含有PHA的培养液培养后，才能制备供核型分析染色体标本。
1 试剂
（1）淋巴细胞培养液配制
RPMI1640液 80%
小牛血清 20%
PHA 适量（根据厂家说明书的使用量）
肝素 100单位
双抗 100单位/毫升
细胞生长因子 适量
最后将配好培养液的酸碱度调PH=7.2-7.4，在无菌的条件下进行配制分装。然后进行分装，每瓶4.5毫升，-20℃保存。
（2）10μg/ml 秋水仙素;
（3）0.075M 低渗液： 2.795g KCl + 500ml 蒸馏水
（4） 固定液 ——甲醇：冰醋酸=3:1（该试剂必需现配现用）
2 采血与细胞培养
用无菌注射器吸取0.2%肝素液0.2毫升（或100单位肝素）湿润针筒，抽取被检者静脉血约2毫升，轻轻转动针筒，使之与肝素混匀，再将解冻至37℃的培养液的瓶盖用酒精棉球擦净消毒，直接用注射器从瓶盖上插入，每瓶接种0.2-0.4毫升的外周血，摇匀后于37℃培养箱培养，如果外周血样本不需要保留，注射器不需吸取肝素，直接抽血，立即接种到培养瓶内，摇匀后培养。这一方法减少污染机会，同时降低肝素的用量（培养液中已含肝素），肝素量过大，会引起溶血。
3 制备中期染色体
3.1 秋水仙素处理
加秋水仙素的时间根据检查目的而定。如果检查放射损伤后染色体畸变应在培养44-54小时后加秋水仙素，这样可避免一部分畸变的染色体丢失；如果用于染色体疾病的诊断，则在培养66-70小时加秋水仙素，以积累更多的分裂中期细胞。
加入秋水仙素摇匀后，置37℃培养箱继续培养4-6小时，终止培养收集细胞。
3.2 低渗处理
将培养物倒入10毫升的刻度离心管内，平衡离心、离心速度1000-1500转/分，时间8-10分钟。小心吸去上清，加入8毫升预热37℃的低渗液，用吸管将现溶物打匀，置37℃水浴15-20分钟。使白细胞膨胀，染色体分散，红细胞解体。
3.3 预固定
低渗后，立即加入1毫升新配的固定液，轻轻打匀，1000-1500转/分，离心8-10分钟。3.3 固定
离心后弃上清，留下管底的细胞，缓慢加入固定液约8毫升并轻轻打匀，37℃水浴30分钟；第一次固定时，先加数滴，轻轻将细胞打匀，再慢慢加至8毫升，打匀，这样染色体标本的形态较好。1000-1500转/分，离心8-10分钟。
3.4 再固定
离心后，弃上清，加入8毫升固定液，打匀。于37℃水浴30分钟，平衡离心、离心速度1000-1500转/分，时间8-10分钟。
3.5 制片
离心后，弃上清，根据沉淀的细胞量，加入适量的固定液打匀，将细胞悬液滴入1-2滴于预冻的干净玻片中央，随即吹气，轻轻过火，空气晾干。
注意事项
①器皿洗涤一定要干净，不能有酸碱残留。
②接种外周血不能太多或太少
③培养细胞温度37±0.5℃
④秋水仙素一定要避光保存，配制后使用期不能超过半年，秋水仙素的处理时间不要少于4小时，也不要超过6小时。
⑤低渗的时间、温度会影响染色体的分散和分裂相的数目。
⑥离心机最好用水平式，转速过快过慢直接影响标本片的质量。
⑦固定液一定要现用现配，固定要彻底，每次不少于30分钟，加固定液不能过快，要沿管壁慢慢加入，否则染色体容易扭转；固定作用不足，染色体出现毛刷状。
⑧玻片的清洁度、冷冻温度会影响染色体的铺展。
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