磁珠与微球应用（第3版）
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背景概要：抗体、药物、抗原、链霉亲和素、地高辛、荧光分子、蛋白A、蛋白G、核酸DNA、核酸药物、Oligo、重组蛋白等常常需要与磁珠偶联，他们相互组合，功能多种多样。下面进行简单介绍。 |
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1.磁珠本身特性
规格：10mg/ml;
磁珠大小：280 nm或1μm；结合力：20-25nmol 核酸或蛋白/mg。
储存：2-8 °C保存。常温运输。
特性：磁珠均一、保证结果一致。
2.链霉亲和素磁珠
应用范围：用于DNA、RNA、蛋白、细胞、细菌的分离；
特性：磁性分离，洗脱，浓缩，手动，自动均可；
捕获方式：直接捕获或间接捕获均可；原理：生物素与链霉亲和素特异性结合
3.具体应用：
（1）特异性基因序列捕获；（2）固化DNA/cDNA；（3）末端磁珠的单链核酸模板；（4）蛋白的纯化；（5）特异性抗体标记磁珠后，细胞分离；（6）免疫方法的应用，如夹心法；
（7）生物分子的筛选，核酸适配体，药物筛选，噬菌体展示；
5.优越特性：
稳定温和的2-8℃保存，室温应用。实验可以重复操作，保证结果良好。
链霉亲和素磁珠详解与步骤
1.亲和素-磁珠，结合的是重组亲和素蛋白，与生物素结合，结合效率较好。
2. 磁珠大小：280 nm或1μm；结合力：20-25nmol核酸或蛋白/mg。大于0.5mg蛋白/ml磁珠；
3.适用实验：分离纯化、IP、CO-IP、RNA pull down等；
4.保存：2-8℃，室温运输；
5.分别配有buffer A(核酸实验)和Buffer B（蛋白实验）
6.磁力架可以赠送（采购满1500元）；
7.结合生物素化的核酸
（1）轻轻震荡磁珠，取100ul磁珠，静置于磁力架，弃液体，Buffer A洗涤。
（2）加入500ul-1ml生物素化的核酸，充分吹打或震荡均匀，室温反应30分钟；
（3）磁珠分离，丢弃液体。
（4）计算磁珠结合核酸的量，根据前后浓度变化，乘以结合体积，计算所得到的核酸量。
8.结合生物素化的抗体或蛋白
（1）震荡磁珠，取出100uL，磁力架静置1分钟，丢弃上清；
（2）加入1ml Buffer B，混均匀，再置于磁力架，洗涤一次，再加1mlBuffer B
（3）加入生物素化的抗体或蛋白，体积控制在1ml内。
（4）室温混合反应磁珠和生物素化的蛋白或抗体；
（5）磁性分离洗涤。如需要分离生物素抗体和亲和素磁珠，加入0.1% SDS煮沸5分钟。
（6）如果实验有背景，磁珠可以洗涤5次左右。
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链霉亲和素磁珠目录 |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
价格 |
说明 |
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SA-Beads-1 链霉亲和素-1 |
007-1001 |
1ml, 10mg/ml |
750 |
亲水性或疏水性 尺寸：1μm |
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SA-Beads-1 链霉亲和素-1 |
007-1002 |
2ml, 10mg/ml |
1350 |
亲水性或疏水性 尺寸：1μm |
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SA-Beads-1 链霉亲和素-1 |
007-1005 |
5ml, 10mg/ml |
3000 |
亲水性或疏水性 尺寸：1μm |
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SA-Beads-28 链霉亲和素-28 |
007-2801 |
1ml, 10mg/ml |
850 |
亲水性或疏水性 尺寸：2.8μm |
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SA-Beads-28 链霉亲和素-28 |
007-2802 |
2ml, 10mg/ml |
1450 |
亲水性或疏水性 尺寸：2.8μm |
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SA-Beads-28 链霉亲和素-1000 |
007-2805 |
5ml, 10mg/ml |
3500 |
亲水性或疏水性 尺寸：2.8μm |
磁珠产品之二：Oligo(T)磁珠（纯化RNA）
1.产品特性
规格：5mg/ml; 大小：200 nm,1μm；结合力：1-2 ug mRNA/mg。货号：007-T
储存：2-8 °C保存。冰块运输。
保存液：0.1 M Tris-HCl, 20 mM EDTA，含0.1%（v/v）Tween-20，0.05%（w/v）NaN3。
2.Oligo(T)磁珠产品
Oligo (dT)25磁珠用总 RNA（动物组织、植物细胞、血液）快速分离出高纯度且完整的mRNA。广泛应用于各种实验样品中。磁珠上的 oligo-dT 与 mRNA通过碱基互补杂交，经过步洗涤、洗脱和磁分离，即可获得高纯度的mRNA。
3.缓冲液
结合缓冲液：20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA.
裂解/结合缓冲液：100 mM Tris-HCl, pH 7.5, 500 mM LiCl, 10 mM EDTA, 1% LiDS, 5 mM dithiothreitol (DTT).
洗涤液A：10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA, 0.1% LiDS.
洗涤液B：10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA 10 mM Tris-HCl, pH 7.5.
四、实验步骤
1. 磁珠预处理
（1）将磁珠悬液漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；
（2）取出100 μL磁珠悬液至1.5 mL 管中；磁珠分离，移去上清液；
（3）加1mL结合缓冲液重悬磁珠，用缓慢吹打5次，磁分离，去上清。
（4）加入100 μL结合缓冲液重悬磁珠。
2. 样品与磁珠比例：
培养细胞（60mm皿）、血液、组织、尿液等50mg加入100μL磁珠。植物100mg加入100μL磁珠。总RNA 100μg加入100μL磁珠。
3.操作步骤：
（1）动物、血液、植物组织：将50mg-100mg植物或动物组织，在液氮中研磨并低温保存，避免RNA降解。将样品收集并转移到新的EP管中，添加1mL裂解/结合缓冲液，匀浆器匀浆1-2min至裂解完全。该步骤尽可能快速操作，避免降解。 13,000rpm离心1 min，将上清液转移至离心管（含有mRNA）。
（2）细胞悬浮液
1×106的动物或植物细胞加1ml裂解/结合缓冲液。吹打均匀，裂解10分钟。
再将DNA剪切。用2ml注射器通过反复吹打剪切溶液中的DNA，不影响mRNA质量。
室温13,000rpm离心5min，将上清液转移至离心管。用于mRNA纯化或在-80℃备用。
4.纯化提取mRNA
（1）将裂解液与磁珠混合（混合比例如上），室温下旋转混合3-5分钟。
（2）磁分离，静置2min，去上清。
（3）室温，用1ml洗涤液A和1ml洗涤液B清洗磁珠，去除污染物或非特异性结合。
（4）分别用1ml洗涤液A和1ml洗涤液B清洗磁珠，去除可能的污染物。
（5）从磁珠中洗脱mRNA：洗涤液B洗后，加入10～20μl的10mM Tris-HCl，75~80°C孵育2min，将含mRNA的上清转移到新RNase-free的离心管。
5. Total RNA中纯化mRNA
（1）取600-1000ng/ul的RNA100ul与100uL结合缓冲液混合。
（2）65°C孵育2min，打开RNA二级结构，置于冰上。
（3）将200 uL混合液与100 uL洗涤后，磁珠在室温下旋转混合3-5min。1mg磁珠大约吸附75μg的总RNA，磁珠应预先处理，分散在100 uL结合缓冲液中。
（4）磁分离，静置1-2min，去上清。
（5）室温下分别用200 uL洗涤液B清洗磁珠，磁珠分离去上清。重复该步骤1次。
（6）加入20μl 的10mM Tris-HCl，80°C孵育2min，将mRNA的上清液转移到离心管。
磁珠产品之三：Protein A/G免疫沉淀磁珠
产品描述
Protein A/G免疫沉淀磁珠，利用Protein A/G包被在超顺磁性磁珠表面，Protein A/G免疫沉淀磁珠表面具有更多的抗体结合位点。在IP实验中被用到。用少量的磁珠，非特异性结合低，简便。Protein A/G免疫沉淀磁珠具有大面积特异的表面区域，将强的抗体吸附和抗原结合。抗原和抗体的结合时间只需10-30分钟，帮您快速完成完整IP实验。Protein A/G免疫沉淀磁珠适用范围比较广广泛，涵盖了细胞裂解液、分泌液上清、血清、动物腹水、漱口水、眼泪等。
特性：
Protein A/G是Protein A和Protein G蛋白的IgG结合区重组融合蛋白，它包含 A的四个Fc结合区域及G的两个Fc结合区域，分子量50kda。相比Protein A，Protein A/G的结合更少依赖pH值，但是却具有了Protein A和G两者的加合效应。
产品参数和价格
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浓度 |
5 mg/mL |
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规格 |
1ml |
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磁珠大小 |
100 nm |
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人IgG结合能力 |
0.4-0.5 mg/mL |
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配体 |
重组蛋白A/G |
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应用： |
rProtein纯化，免疫沉淀 |
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pH稳定性： |
7.5 |
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运输条件： |
低温运输2-8℃。 |
蛋白A/G免疫沉淀磁珠
货号：001.515 规格：1ml,2ml,3ml,5ml,10ml。储存：4℃有效期：2年
背景介绍：1）Protein A是一种金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，Protein G是链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能大致相同，主要与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，两者结合特异性上略有同。2）Protein A和ProteinG免疫沉淀磁珠，是将Protein A/G通过化学键定向包被到超顺磁性微球表面，有较好的抗体结合能力和低的蛋白非特异性吸附率，可从血清样品中分离出纯度>90%抗体。Protein A/G免疫磁珠共价偶联蛋白A和蛋白G，比单独蛋白A或者蛋白G结合更广。3）蛋白A和蛋白G不仅维持其本身的Ig亲和特性，也去除天然蛋白本身的非蛋白主要结合域以降低非特异性结合。4）应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。
产品性质：
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Matrix spherical |
磁性微球 |
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配体（Ligand） |
重组ProteinA/G |
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结合能力（Binding Capacity） |
＞50µgIgG/mg |
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粒径 （Particle size） |
1μm |
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磁珠浓度（Concentration） |
10mg/mL |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
PBS，0.01% Tween-20, 0.02% NaN3e |
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应用（Application） |
rProtein Purification, Immunoprecipitation |
使用方法：
1. 缓冲液配制
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平衡/结合/ 洗杂液: |
0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0 |
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交联液： |
0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2 |
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中和缓冲液： |
1M Tris-HCl，pH8.5 |
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洗脱缓冲液： |
0.1M 甘氨酸，pH 3.0 |
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终止液： |
50 mM Tris, pH 7.5 |
2. 抗原样品制备
（1）血清样品处理：若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
（2）悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 500g, 10min），弃上清后称重，按每毫克细胞50µL的比例用1×PBS洗涤2次；按每毫克细胞5-10µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
（3）贴壁细胞样品处理：去培养基，按每 1.0×105个细胞150µL的比例用1×PBS洗涤两次；刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按每 1.0×105个细胞20-30µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
（3）大肠杆菌样品处理：离心大肠杆菌（4℃, 12000g, 2min）， 弃上清称重， 按每克（湿重）菌体10mL的比例用1×PBS洗涤2次；按每克（湿重）菌体5-10mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，重悬菌体，超声裂解，离心收集上清（4℃, 17000g, 10min）。
3. 磁珠预处理：将磁珠漩涡振荡1min，使其充分混悬；取25-50µL（相当于50-100µg）磁珠悬液置于1.5mL EP管中。加入200µL结合缓冲液洗涤，进行磁性分离，吸弃上清，重复1次。加入200 µL结合缓冲液重悬磁珠备用。
4. 抗体吸附
加入 100 μl平衡液将磁珠悬浮，加入目标抗体溶液，充分混匀。 室温孵育 10min，可以振荡或漩涡混合均匀。 置于磁分离器上，待磁珠吸附后，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。 加500μl 洗杂液混均，置于磁架上待磁吸附后，弃上清。重洗至少 3次。
5. 抗体交联 (备选)
1） 如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，直接进行操作 2.5。 50ul-1ml 磁珠量均可以按照以下步骤操作，无需额外增加交联液体积。
2）加入 1ml 交联液，振荡悬浮，置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸弃上 清液。该操作重复两次。
3）再加入1ml 含有20 mM DMP（dimetylpimelimidate dihydrochloride）的交联液（需现用现配）。振荡悬浮，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管， 促使溶液和磁珠充分接触，约30min后，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清 后，吸弃上清液。
4）用1ml终止液悬浮磁珠终止交联反应，室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转 离心管，促使溶液和磁珠充分接触，约15min后，置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。
5）加 1ml平衡液，颠倒混匀，置于磁架，约 1min，溶液变澄清后，弃上清液。再重复两次。
6. 抗原结合反应
1) 加入含有抗原的样品（通常100-1000μL)，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。
2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。
3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，以备后续检测。
4) 向离心管中加入1ml 洗杂液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管，再重复洗涤两次。
7．抗原洗脱
A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。
1) 从磁分离器上取下离心管，向其中加入25μl 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀， 95℃加热 5min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集上清液进行SDS-PAGE检测。
B. 非变性洗脱
1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入50 μl 洗脱液，混合均匀，室温孵育5min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集洗脱液至新的 EP 管中。
3) 重复步骤 1）和2），收集洗脱液，与2）中洗脱液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
磁珠产品之四：羧基磁珠偶联核酸
1.原理简介
羧基磁珠是常用的偶联载体，本试剂盒提供用于羧基与氨基的偶联所需的缓冲液，譬如羧基微珠偶联抗体、氨基修饰DNA等。
2.试剂组成
缓冲液 体积 组成 注意
Coupling Buffer
（偶联缓冲液） 50 ml 50 mM MES, pH 6.0, 0.01% Triton X-100
Coupling Agent
（偶联试剂） 50mg×1 EDC；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer） 尽量现配现用，溶液，不超过1个月
50mg×1 Sulfo-NHS；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer） 尽量现配现用，溶液，不超过1个月
Quench Buffer
（淬灭缓冲液） 50 ml TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer
（储存缓冲液） 10 ml TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20, 0.05%NaN3.
3.两步偶联
本方案通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。本方案中涉及的偶联对象（蛋白、氨基修饰核酸、其它含伯氨基化合物）的使用量可根据需要进一步优化以达到最优偶联率。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于偶联。
2. 涡旋振荡重悬羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离并吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。混匀。
7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
9. 加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白或配体。涡旋混匀。室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架，磁分离吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如优化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
14. 从磁力架上取下EP管。加100μL存储缓冲液。混合，并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。
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货号 |
名称 |
规格 |
浓度 |
价格 |
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200.001 |
Oligo（T）-磁珠-生物素 10mg/ml |
1ml |
2-8℃ |
1150 |
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200.002 |
Oligo（T）-磁珠 10mg/ml |
1ml |
2-8℃ |
1150 |
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200.015 |
磁珠-Goat Anti-Mouse IgG（H+L） Secondary Antibody |
0.5mg |
2-8℃ |
750 |
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200.020 |
磁珠-Goat Anti-Rabbit IgG（H+L） Secondary Antibody |
0.5mg |
2-8℃ |
750 |
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200.025 |
磁珠-Rabbit Anti-Goat IgG（H+L） Secondary Antibody |
0.5mg |
2-8℃ |
750 |
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200.030 |
磁珠-Rabbit Anti-HumanIgG（H+L）Secondary Antibody |
0.5mg |
2-8℃ |
750 |
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200.035 |
磁珠-Rabbit Anti-Rat IgG（H+L） Secondary Antibody |
0.5mg |
2-8℃ |
1000 |
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200.040 |
链霉亲和素磁珠 1mg/ml |
10ml |
2-8℃ |
1000 |
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200.045 |
ProteinA/G磁珠 1mg/ml |
10ml |
2-8℃ |
1000 |
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200.050 |
流式矫正荧光颗粒标准品 |
10mg |
2-8℃ |
1000 |
备注：我公司提供的磁珠直径均是1μM，如果特殊需要请联系我们。
我们还可以提供其他大分子物质的磁珠标记。
磁珠标记服务
外显子生物实验室，提供大分子与磁珠标记的服务：
1、标记不同颗粒、粒径的磁珠，如：300、500、1000、2800nm的磁珠；
2、可在磁珠上标记不同的大分子与小分子：
蛋白、抗体、寡合核酸、分子药物、地高辛、生物素等；
3、可标记不同荧光或抗原：FITC、Cy3、Cy5、AMCA等；
4、标记方法涵盖：叠氮化合物、炔类化合物、点击化学反应、氨基反应等；
标记后的磁珠应用领域：
（1）链霉亲和素磁珠
用于生物素化核酸、生物素化抗体，其他生物素化配体和靶分子的分离和检测，主要用于免疫检测、免疫沉淀、细胞分选、纯化等。
（2）蛋白A或G磁珠标记可用于抗体偶联、蛋白偶联、富集等。
（3）可用于药物筛选、蛋白质相互作用的研究、细胞间的相互作用。
磁珠标记客户须知：
（1）提供需要标记的样品，如核酸、药物、蛋白。我们也可以提供；
（2）标记周期：3-4个工作日
（3）收费：标记与纯化费：500元每次，试剂另外收费
抗体或核酸和荧光、生物素、地高辛表及服务
技术背景：
在研究或生产中，常需要将核酸、蛋白、抗体、多肽、磁珠等进行标记，如标记荧光、生物素、地高辛、HRP等。后续应用于免疫化学、荧光原位杂交 、细胞示踪、受体标记、细胞化学等，还可用于研究分子结构功能，定位及相互作用。
标记技术服务：
l 核酸探针标记修饰-荧光、生物素、地高辛、HRP、微（磁）珠;
l 抗体的标记修饰-荧光、生物素、地高辛、HRP、微（磁）珠;
l 蛋白的标记修饰-荧光、生物素、地高辛、HRP、微（磁）珠 ;
l 荧光包括FITC、Cy3、Cy5、Cy5.5等。
标记修饰位置和分子：
l 核酸探针：5’端 、3’端等
l 蛋白或多肽的N端 、C端
l 原子点荧光
l 磁珠、纳米、微球
l 生物素、凝集素
l HRP、AP
标记和修饰服务说明：
1）客户仅提供抗体、抗原、多肽、核酸等；
2）客户选择所标记物质：如荧光、生物素、地高辛等；
3）时间1-2周，价格500-1000元/次，至少满足10-20次实验结果；
磁珠和寡核苷酸、引物、DNA核酸探针之间标记服务
一、标记磁珠的核酸探针、引物、核酸片段：
货号：C00X00 名称：标记磁珠的核酸探针、磁珠引物 规格：1ml 储存：2-8℃
（1）磁珠标记核酸、探针、引物介绍：
l 基本原理：通过化学偶联技术将磁珠和核酸探针、引物偶联，提供磁珠标DNA核酸探针、寡核苷酸、引物、RNA等。
l 用途：特异性核酸分离、提取纯化、核酸诊断、核酸富集、进一步研究核酸和蛋白的之间的作用、核酸和核酸的相互作用等。
（2）核酸磁珠的特点：
Ø 客户提供核酸探针序列，如oligo(T)等，也可根据客户要求设计核酸探针，标记偶联磁珠；
Ø 除了标记磁珠外，一直以来，我们还提供蛋白与核酸标记，包括各种荧光，生物素，地高辛技术服务。
（3）提供的产品成份：
（1）磁珠标记的核酸探针 1ml，（2）结合、洗涤缓冲液等。
（4）保存条件
Ø 所有试剂2-8℃保存;
Ø 试剂盒在有效期内的稳定;不要使用已经过期的试剂;
Ø 用前，将所有的试剂恢复至室温（20-25℃），探针溶液必须混匀;
Ø 注意实验安全，带手套操作。
咨询方式：
联系电话：020-89895006 邮箱：focobio@126.com
微信或电话：180 1199 7127 QQ：1050304988
网站： www.focofish.com www.focobio.com
地址：广州市海珠区敦和路189号留学人员创业基地2号楼404-405
