蛋白酶荧光检测试剂盒 V1
货号: 001.41 试剂盒：100 T 运输：4℃， 储存:–20℃
产品描述：蛋白酶荧光检测试剂盒是即用型，简单便捷。主要检测蛋白酶活性的存在, 原理是利用异硫氰酸荧光素 (FITC) 标记的酪蛋白作为底物，荧光被淬灭，蛋白降解后，释放荧光。本试剂盒可检测多种蛋白酶。适用于检测丝氨酸、半胱氨酸、金属和天冬氨酸蛋白酶等。蛋白酶降解导致FITC标记的酪蛋白底物裂解成更小的片段，在酸性条件下这些片段处于溶解状态。测量FITC标记片段的荧光，激发波长:485 nm，发射波长:535 nm，间接反映酶的存在。灵敏度：所述试剂盒程序检测浓度为 50ng每个反应
试剂盒组成：
A：蛋白酶反应缓冲液2X：5ml
B：三氯乙酸 (TCA) 溶液10X：5mL 6.1 N
C：异硫氰酸荧光素 (FITC)：100ul
D：阳性对照：胰蛋白酶，20 mg
步骤：
1. 对于每个测试样品，将 40 uL 孵育缓冲液与10-40uL 测试样品加入微量离心管中。对于具有高蛋白酶活性的测试样品，可能需要进行样品稀释。
2. 阳性对照样品：向微量离心管中加入 40 µL 孵育缓冲液、和 10 µL 胰蛋白酶对照样本，制备适当的对照样本（参见对照样本）。
3. 空白对照：向微量离心管中加入 40uL孵育缓冲液，10-40uL超纯水，制备空白样品。
4. 轻轻混合，因为过度的湍流可能会导致高荧光背景并降低检测的灵敏度。 观察荧光变化。最长孵育至 24 小时，可提高灵敏度。注意不要超过 24 小时，因为 FITC-酪蛋白可能开始降解，导致高荧光增高。
5. 孵育后，向每个微量离心管中加入40μL的1X TCA 溶液。
6. 轻轻混合并在 37°C 避光孵育 30 -60分钟。
7荧光测量：荧光定量PCR仪，荧光检测仪，荧光酶标仪均可。在 485 nm 处激发的荧光强度并监测 535 nm 的发射波长。
8.检测限：产生显着荧光读数高于空白样品所得值的蛋白酶量，通常是50ng。
9.读数等于用空白样品获得的值的 1.2倍 被认为阳性。
10.将胰蛋白酶对照溶液配制成20mg/ml，即1ug/uL。再得到10ng/ul 的对照溶液，加入5uL。
11.异硫氰酸荧光素作为可能的仪器校准或确定 FITC 信号的线性范围的对照。
注意事项：仅供研发使用, 不用于药物、诊断或其他用途。
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