组织原位ALP染色试剂盒
货号(Cat.):CB2307 保存(Store):避光,-20℃ 规格:100T 价格:300元
原理介绍:
碱性磷酸酶(ALP)在哺乳动物中主要存在于肝脏、骨骼和肾脏。成骨细胞能够分泌碱性磷酸酶,是骨形成所必需的酶,是成骨细胞分化和功能成熟的早期标志。了解骨代谢状态是研究细胞生理活性的一个有效方法。对ALP染色后可了解成骨细胞的骨形成情况,其原理是采用偶氮偶联法,在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AS-BI磷酸盐水解,释放出的磷酸萘酚,不偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。
适用于:骨细胞涂片、骨组织冰冻切片、骨组织石碏切片等,观察成骨细胞的染色结果,检查细胞的分化状态和骨组织的分布情况。仅供研究,不得用于诊断。
试剂盒组分:
1.核染色试剂··············10 mL(用核染色试剂使各种细胞核呈蓝绿色。)
2.碱性磷酸酶预混物溶液····30 mL(ALP染色剂使成骨细胞的细胞膜、软骨细胞和细胞间膜呈茶褐色)
样品前期处理:
注:ALP染色使用不能用福尔马林固定的新鲜材料,如果未在短时间内固定,会导致酶失活,因此推荐80%乙醇固定。ALP酶是含有金属Zn蛋白。通过脱钙处理,酶的组成成分Zn被去除,导致酶失活。为弥补此缺点,需要添加ZnSO4,作为ALP活化剂,也可尝试添加相同螯合剂EDTA溶液,染色结果会更好。
实验步骤:
材料获取→固定→脱脂脱钙→脱水、包埋→切片、干燥→染色、封片→镜检。
阳性结果判断:ALP的活性部位呈蓝色或茶褐色;ALP酶活性染色使用的是预混物溶液,简单适用,骨组织切片(脱钙GMA树脂包埋切片)或培养的细胞。
组织原位TRAP染色试剂盒
货号(Cat.):CB2308 保存(Store):避光,-20℃ 规格:100T 300元
产品原理介绍:
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶,只出现在特异性细胞中,主要用于检测骨、骨细胞中破骨细胞的染色,破骨细胞呈红色,细胞核浅蓝色。TRAP分布广,遍布各种组织,存在于细胞的溶酶体内,溶酶体标志酶。pH为4.5~5.5。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。当底物中存在酒石酸时,细胞内抗酒石酸酸性磷酸酶催化底物水解,生成不溶性的偶氮染料沉淀,用TRAP染色剂使破骨细胞呈红色,可检查细胞的分化状态和骨组织的分布情况。
适用于:新鲜血涂片、细胞涂片,亦可用于冰冻切片、石蜡切片等。本染色试剂盒适用于生物或药物研究。仅供研究,不得用于诊断。
试剂盒组分:
1.酒石酸溶液(×10)·······3 mL
2. 酸性磷酸酶底物液A······30 mL
3. 酸性磷酸酶底物液B······3 mL
4. 核染色试剂··············10 mL(用核染色试剂使各种细胞核呈蓝绿色。)
样品前期处理:
实验步骤:
材料获取→固定→脱脂脱钙→脱水、包埋→切片、干燥→染色、封片→镜检
结果判断:以萘酚二磷酸盐为底物,偶氮副品红为显色剂,TRAP在酒石酸钾钠存在条件下将萘酚AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI,与显色剂结合形成红色沉淀,定位于细胞质中,若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。