动物或人胚胎单细胞取材方法
（1）在受精后第三天，用机械法对胚胎活检,胚胎处于5-10细胞状态,这个阶段的活检，后囊胚形成率最高。
（2）每个胚胎取1-3个细胞。对于5细胞胚胎，只取1个细胞；6-10细胞胚胎通常取2个细胞;对于10细胞胚胎可以取3个。
（3）活检完成后胚胎放回培养箱继续培养。
（4）第二日FISH结果出来后,将染色体正常或平衡易位胚胎移植入宫腔,对于人，第14天测定血HCG、21天做B超以检查是否妊娠。对于动物，继续观察。
（5）细胞从胚胎后先经单细胞处理液A洗涤2次,吸置硅化玻片上,在相差显微镜下用PBS或0.075M KCl低渗处理1分钟,立即滴加10-20µl单细胞处理液B让其裂解3-5分钟左右,此时，细胞浆完全去除。裂解后将玻片置37℃平板上,1%甲醛或卡氏固定5分钟,70%、90%及100%梯度乙醇脱水各5分钟。
卵裂球单细胞取材方法
（1）划圈：用钻石笔在玻片背面划一个圆圈或三角。
（2）准备巴氏管，用它吸取胚胎及卵裂球。
（3）制滴：在皿内制备2个液滴、1个PBS液，1个液滴0.01HCl/0.05 Triton。
（4）低渗：将胚胎移入低渗液滴中，换内径吸管吹吸胚胎，使卵裂球分散。将卵裂球移至另一个低渗液滴中（0.075MKCl），静置1-5分钟。
（6）卵裂球固定：用内径吸管将低渗液滴中的卵裂球移至玻片的圆圈内，液体自然蒸发过程中，在倒置显微镜下观察胞膜破裂、胞质散开、胞核显露，用管尖触动液体有助于分离核及溶解胞质。待液干燥后，在小圆圈内滴加0.1%甲醛溶液或卡氏固定液，去除残留胞浆。干燥备用。
（7）细胞定位：固定液完全干燥后，将其放在显微镜下找到细胞核，记录坐标。
单细胞FISH步骤过程
（1）变性：加入约20mlDNA变性液到玻片盒，水浴加热至77±2℃，轻轻将玻片放入玻片盒中，77±2℃变性5min，取出后马上依次放入预冷的75%、85%、100%乙醇各2min，晾干。注意：必须等玻片的杂交区域完全干燥，再滴加探针。
以下步骤，注意避光
（2）探针准备
按每张片子6-10μl探针，根据片子数量N，微量移液器取6×N μl探针至0.2ml PCR管，探针94℃变性4min，37℃平衡2min。可用PCR仪变性。
（3）杂交
平衡后的探针滴加在标本上，盖盖玻片，放入湿盒中，37℃-42℃杂交过夜（可以使用杂交仪或者湿盒放在干燥箱）。
Ø 提示：如果有杂交仪，可以共变性，简单便捷（外显子生物提供三种杂交仪）。
（4）洗涤（共准备3缸洗液）
玻片放入常温洗液中，浸泡2-5min，使盖玻片自动脱落，将玻片移至已经预热的42℃的洗液，浸泡5min，再移至常温洗液，浸泡5min.
（5）复染
滴加20μl DAPI，盖盖玻片，暗处静置15min，荧光显微镜观察。
&需要试剂和耗材&
1，封片胶，0.075MKCl 100ml，PBS 1包/L，DAPI溶液1ml，（外显子生物提供）
2，0.1%甲醛溶液（100ml），卡氏固定液（100ml，甲醇：冰醋酸=3：1），
3，单细胞处理液A（主成份：5% FBS/PBS）
4，单细胞处理液B（主成份：0.01N HCI/0.1%Tween 20/0.01ES）
5，探针：各种FISH探针（10Test），包含探针变性液。请联系外显子生物。
6，FISH专用防脱玻片（外显子生物）。
7，原位杂交仪：
湿润盒法原位杂交箱，2000元；
原位杂交仪：8片规格，4000元；原位杂交仪：12片，1.8万元/台。
8，其他：吹风筒，加样抢，灭菌枪头，一般实验室都具备。
外显子生物提供原位杂交的探针、试剂、设备、实验指导，如果需要请联系我们。
E-mail:focobio@126.com Tel:020-39352126 24小时反馈电话：180-1199-7127
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